Образование внеклеточных ловушек нейтрофилами и моноцитами периферической крови больных ревматоидным артритом: изучение нового цитруллинсодержащего аутоантигена

Учитывая значение, которое придается антицитруллиновым антителам (АЦЦП) в аутоиммунном ответе при ревматоидном артрите (РА), особый интерес представляет поиск субклеточных структур, которые включают наиболее типичные для РА антигены в одном компартменте и подвержены систематическому цитруллинированию. Наиболее вероятным кандидатом на роль таких структур можно рассматривать внеклеточные ловушки нейтрофилов (NET) и моноцитов (ЕТ). Цель — оценить способность нейтрофилов и моноцитов периферической крови к спонтанному и индуцированному образованию внеклеточных ловушек у больных РА. В исследование были включены 32 больных РА и 30 практически здоровых лиц, составивших референтную группу. Выделение нейтрофилов и моноцитов периферической крови производили с помощью одноэтапного центрифугирования в тройном ступенчатом градиенте фиколла-амидотризоата. Качественный состав лейкоцитарных фракций оценивали микроскопически, их жизнеспособность — с использованием трипанового синего, неспецифическую активацию клеток — по тесту с нитросиним тетразолием. Индукцию образования внеклеточных ловушек нейтрофилами in vitro выполняли с использованием форбол-12-миристат-13-ацетата, моноцитами — при помощи пирогенала. Оценку спонтанного и индуцированного образования внеклеточных ловушек производили методом люминесцентной микроскопии.

Полученные клеточные фракции содержали низкий процент примесей и высокую долю жизнеспособных клеток, находящихся в неактивированном состоянии. Обнаружено, что у больных РА средняя доля спонтанного образования NET и ET выше по сравнению с контрольной группой. При этом частота ловушкообразования для нейтрофилов больных РА, позитивных по АЦЦП, имела тенденцию к повышению по сравнению с образцами АЦЦП-негативных пациентов. Для моноцитов существенного различия между данными подгруппами не зафиксировано. Морфология внеклеточных ловушек при люминесцентной микроскопии нейтрофилов и моноцитов здоровых лиц и больных РА не демонстрировала существенных межиндивидуальных различий. Средняя доля индуцированного ловушкообразования при РА была значительно выше в сравнении с референтной группой. Уровень включения миелопероксидазы в ЕТ был существенно ниже по сравнению с NET. Полученные нами данные дают основание рассматривать NET как возможный источник цитруллинированных аутоантигенов, участвующих в продукции аутоантител и стимуляции воспалительных аутоиммунных реакции при РА. В то же время роль ЕТ в этом процессе выражена в меньшей степени.

1. Бедина С.А., Трофименко А.С., Мамус М.А., Тихомирова Е.А., Мозговая Е.Э., Спицина С.С., Девятаева Н.М. Образование внеклеточных ловушек нейтрофилов у больных ревматоидным артритом // Современные проблемы науки и образования, 2020. № 2.

2. Мозговая Е.Э., Трофименко А.С., Мамус М.А., Тихомирова Е.А., Бедина С.А., Спицина С.С. Образование внеклеточных ловушек моноцитов при ревматоидном артрите // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований, 2019. № 10-1. С. 86-89.

3. Aletaha D., Neogi T., Silman A.J., Funovits J., Felson D.T., Bingham 3rd C.O., Birnbaum N.S., Burmester G.R., Bykerk V.P., Cohen M.D., Combe B., Costenbader K.H., Dougados M., Emery P., Ferraccioli G., Hazes J.M.W., Hobbs K., Huizinga T.W.J., Kavanaugh A., Kay J., Kvien T.K., Laing T., Mease P, Menard H.A., Moreland L.W., Naden R.L., Pincus T., Smolen J.S., Stanislawska-Biernat E., Symmons D., Tak P.P., Upchurch K.S., Vencovsky J., Wolfe F., Hawker G. 2010 rheumatoid arthritis classification criteria: an American college of rheumatology / European league against rheumatism collaborative initiative. Ann. Rheum. Dis., 2010, Vol.69, pp. 1580-1588.

4. Angelotti F., Parma A., Cafaro G., Capecchi R., Alunno A., Puxeddu I. One year in review 2017: pathogenesis of rheumatoid arthritis. Clin. Exp. Rheumatol., 2017, Vol. 35, no. 3, pp. 368-378.

5. Apel F., Zychlinsky A., Kenny E.F. The role of neutrophil extracellular traps in rheumatic diseases. Nat. Rev. Rheumatol., 2018, Vol. 14, no. 8, pp. 467-475.

6. Brinkmann V., Reichard U., Goosmann C., Fauler B., Uhlemann Y., Weiss D.S., Weinrauch Y., Zychlinsky A. Neutrophil extracellular traps kill bacteria. Science, 2004, Vol. 303, pp. 1532-1535.

7. Carmona L., Cross M., Williams B., Lassere M., March L. Rheumatoid arthritis. Best Pract.Res. Clin. Rheumatol., 2010, Vol. 24, no. 6, pp. 733-745.

8. Granger V, Faille D., Marani V, Not'] B., Gallais Y., Szely N., Flament H., Pallardy M., Chollet-Martin S., Chaisemartin L. Human blood monocytes are able to form extracellular traps. J. Leukoc. Biol., 2017, Vol. 102, no. 3, pp. 775-781.

9. Kongpachith S., Lingampalli N., Ju C.H., Blum L.K., Lu D.R., Elliott S.E., Mao R., Robinson W.H. Affinity maturation of the anti-citrullinated protein antibody paratope drives epitope spreading and polyreactivity in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheumatol., 2019, Vol. 71, no. 4, pp. 507-517.

10. Lin Y.J., Anzaghe M., Schulke S. Update on the pathomechanism, diagnosis, and treatment options for rheumatoid arthritis. Cells, 2020, Vol. 9, no. 4, 880. doi: 10.3390/cells9040880.

11. Wells G., Becker J.-C., Teng J., Dougados M., Schiff M., Smolen J., Aletaha D., van Riel P.L.C.M. Validation of the 28-joint Disease Activity Score (DAS28) and European League Against Rheumatism response criteria based on C-reactive protein against disease progression in patients with rheumatoid arthritis, and comparison with the DAS28 based on erythrocyte sedimentation rate. Ann. Rheum. Dis., 2009, Vol. 68, no. 6, pp. 954-960.